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熒光定量PCR（Real-timePCR），是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時檢測,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。那么你知道熒光定量PCR的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！以探針法熒光定量PCR為例：PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。開始時，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收，檢測不到熒光信號...

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，去除原培養(yǎng)基并將細(xì)胞從原培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基中，維持細(xì)胞的活力與增殖。細(xì)胞傳代既可以擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)量，也能夠避免細(xì)胞因進(jìn)入平臺期而出現(xiàn)生長抑制甚至死亡的情況。那么你知道細(xì)胞傳代的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？有何注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來看看吧！一、實(shí)驗(yàn)步驟1.貼壁細(xì)胞的傳代:1)倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及密度，評估細(xì)胞的狀態(tài)，以作為傳代比例的參考。2)提前紫外殺菌（至少30min為宜）操作臺及實(shí)驗(yàn)材料。3)注意無菌操作，在操作臺中吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)舊培養(yǎng)液（盡可能去...

在蛋白表達(dá)系統(tǒng)的相關(guān)研究中，從頭合成蛋白質(zhì)并不是一個可行的選擇。因此需要借助活細(xì)胞或細(xì)胞器用作生產(chǎn)和構(gòu)建蛋白質(zhì)的工廠。那么你知道該如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)嗎？讓我們一起來看看吧！目前，較為主流的表達(dá)宿主有大腸桿菌（E.coli）、畢赤酵母（P.pastoris）、昆蟲-桿狀病毒（Bac-to-Bac系統(tǒng)）以及哺乳動物細(xì)胞系（CHO、HEK293）等。一、細(xì)菌優(yōu)點(diǎn)：1.遺傳背景清楚；2.繁殖快、成本低、抗污染能力強(qiáng)；3.表達(dá)量高、表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對簡單、穩(wěn)定性好；4.商品化的載體...

胎牛血清是從胎牛臍帶血中提取的一種生物制品。它是一種黃褐色液體，主要由蛋白質(zhì)、氨基酸、碳水化合物、脂類、礦物質(zhì)和生長因子等組成。那么你知道胎牛血清的用途和應(yīng)用領(lǐng)域嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞和組織培養(yǎng)：胎牛血清是常用的培養(yǎng)基補(bǔ)充物之一，提供細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子和調(diào)節(jié)因子。它能夠維持細(xì)胞的適宜環(huán)境，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化，并提高細(xì)胞產(chǎn)量和特定細(xì)胞類型的功能。二、疫苗和生物制品生產(chǎn)：胎牛血清在疫苗、抗體和生物藥物的生產(chǎn)過程中起著重要的作用。它可以作為培養(yǎng)基的補(bǔ)充物，...

電轉(zhuǎn)，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA、mRNA等）導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi)，來改變細(xì)胞的特性，從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的，是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么影響電轉(zhuǎn)效率的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、電轉(zhuǎn)過程1）電轉(zhuǎn)的完整操作步驟包括電轉(zhuǎn)前操作，電轉(zhuǎn)執(zhí)行和電轉(zhuǎn)后培養(yǎng)。在進(jìn)行電轉(zhuǎn)前操作時，電轉(zhuǎn)試劑、細(xì)胞與轉(zhuǎn)染底物要進(jìn)行混勻，如果混勻時過于激烈，會破壞轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低；2）在進(jìn)行電轉(zhuǎn)前操作時，電擊緩沖液的選擇...