細(xì)胞凍存是指將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，以達(dá)到減少細(xì)胞代謝的作用，從而達(dá)到對(duì)細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存進(jìn)行保種的目的，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)或臨床使用。那么你知道細(xì)胞凍存的原理是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、細(xì)胞凍存原理

1. 當(dāng)溫度低至-70℃時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性全部停止，代謝活動(dòng)停止，故實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期保存的目的。

2. 隨著溫度降低，細(xì)胞內(nèi)外的水分都會(huì)結(jié)晶，所形成的冰晶會(huì)造成細(xì)胞膜和細(xì)胞器的破壞，從而引起細(xì)胞死亡，特別是0~-20℃的階段，冰晶呈針狀，及其引發(fā)細(xì)胞損傷。在不加任何保護(hù)劑條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。

3. 常見的冷凍保護(hù)劑是甘油或二甲基亞砜（DMSO）。DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍存過(guò)程，同時(shí)增加細(xì)胞膜的通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。

二、保護(hù)劑的選擇

1. 細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。

2. 對(duì)特別敏感的細(xì)胞在凍存時(shí)需測(cè)試適用的凍存液。例如神經(jīng)元細(xì)胞凍存時(shí)需選擇無(wú)血清凍存液，避免復(fù)蘇后分化。

三、細(xì)胞凍存的最佳時(shí)期

1. 用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，匯合度約 90% 的時(shí)候，這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。

2. 對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行微生物污染物檢測(cè)，特別是支原體，確保細(xì)胞沒(méi)有任何的污染。在細(xì)胞的收集過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)操作要盡可能的溫和，避免細(xì)胞受損。

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