猴痘病毒檢測試劑盒的組合物由一個引物對和一個探針組成：引物對由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成：探針的序列為序列表中序列3。利用本發(fā)明所提供的NASBA試劑盒對猴痘病毒進(jìn)行檢測，具有操作簡便，快速、特異的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明可快速篩查猴痘病毒，對口岸輸入性疾病篩查具有重要意義，為防御疾病的傳入做好技術(shù)支撐和戰(zhàn)略儲備，滿足當(dāng)前衛(wèi)生檢疫的需求。
 

　　猴痘病毒檢測試劑盒檢測結(jié)果和判定標(biāo)準(zhǔn)：
 

　　試驗(yàn)結(jié)果成立的條件：陽性對照PCR反應(yīng)產(chǎn)物電泳后在301bp的位置上出現(xiàn)特異性條帶；陰性對照PCR產(chǎn)物電泳后沒有條帶，試驗(yàn)結(jié)果成立，否則結(jié)果不成立。
 

　　結(jié)果判斷：在試驗(yàn)結(jié)果成立的前提下，如果樣品PCR反應(yīng)有特異性的條帶，則樣品為陽性；反之，為陰性。
 

　　猴痘病毒檢測試劑盒性能檢測：
 

　　1.PCR檢測試劑盒的重復(fù)性檢測對同一批提取的猴痘病毒陽性模板進(jìn)行10次PCR擴(kuò)增，觀察試劑盒對同一批次陽性模板擴(kuò)增的結(jié)果。對10批提取的猴痘病毒陽性模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，觀察試劑盒對不同批次提取的陽性模板擴(kuò)增的結(jié)果。
 

　　2.PCR檢測試劑盒的穩(wěn)定性檢測用配制好的檢測試劑盒分裝后保存在-20℃冰箱中，每隔7d對陽性模板進(jìn)行PCR檢測，連續(xù)檢測6個月，觀察試劑盒在-20℃保存的穩(wěn)定性。用配制好的PCR反應(yīng)混合物分裝后分別保存在4℃冰箱或室溫中，每隔12h對陽性模板進(jìn)行PCR檢測，連續(xù)檢測4d，觀察試劑盒在室溫或4℃保存的穩(wěn)定性。用配制好的PCR反應(yīng)混合物分裝后保存在-20℃冰箱后，分別凍融1~10次后，對陽性模板進(jìn)行PCR檢測，觀察凍融次數(shù)對試劑盒的影響。